人类受精是一系列复杂的过程,精子进入卵子后,精子头部解聚形成雄原核(malepronuclei),同时卵子被激活,经过一系列转化形成雌原核(female pronuclei)。雌性原核形成一般是同步的,在授精后最早6小时直至20小时都可能观察到雌雄原核,即2PN,之后雌雄原核相互靠近,融合,原核消失,受精完成。因此观察到双原核提示受精成功,雌雄原核融合是受精完成的标志。
在临床中,由于工作时间以及胚胎的培养环境问题,大多数生殖中心只在授精后16~20小时观察原核的情况。若未观察到原核,即0PN,0PN可能存在于以下几种情况:
1、原核发育偏慢,受精时间延迟,观察时间内尚未形成原核。
2、原核发育过快,在观察时间内卵子已经完成受精,原核已经融合、溶解,以上这两种情况其实卵子成功受精,最终可以获得正常胚胎。
3、卵子未受精。部分0PN可以发育卵裂期及囊胚期,其形态及胚胎发育速度与正常受精的2PN来源的胚胎相似,但其是不是正常受精而来并不确定。
图一2PN
图二 0PN
在临床工作中,会优先选择2PN来源的胚胎进行移植,但有的时候,特别是对于年龄偏大、卵巢功能下降的患者,不能获得足够的2PN来源胚胎,那么这时,0PN来源的胚胎能否移植,是否安全呢?
Ming Li等为了探究0PN来源胚胎的价值,比较卵裂期0PN胚胎、囊胚期0PN胚胎与相应2PN胚胎的妊娠结局。其中0PN卵裂期/囊胚期胚胎共368个。研究发现,卵裂期胚胎中,0PN胚胎妊娠率显著低于2PN胚胎(新鲜周期:8.04%vs 19.50%,冷冻周期:15.38%vs 28.24%,P<0.05),而囊胚期胚胎中,0PN胚胎妊娠率与2PN相似(39.56%vs 48.18%,P>0.05)。研究认为,胚胎自卵裂期发育到囊胚期,也是选择与淘汰的过程,当胚胎本身存在问题,那么它很难进一步发育为囊胚,延长体外培养的时间,可以逐渐筛除非二倍体胚胎,增加正常胚胎的比例。最终,该研究0PN来源的胚胎中,共有44个宝宝出生,全部健康,认为0PN胚胎是安全的。
其他研究中,Manor、Malcov等分析了0PN胚胎,发现部分0PN的胚胎是正常二倍体,认为可以用于胚胎移植。但是目前关于0PN胚胎的研究相对较少,0PN来源胚胎移植的安全性仍需要大样本的研究和长时间的随访,目前我中心0PN来源的卵裂期胚胎不会进行移植,会继续体外培养至囊胚期才会进行冷冻保存。在患者无2PN胚胎时,在患者充分知情同意的情况下,可以移植0PN胚胎。
另外,近年兴起的延时摄像胚胎观测技术(time-lapse)能动态观察胚胎发育,其图像采集间隔时间短并且固定(时间间隔一般为5~20min),不仅可以对胚胎的形态进行动态的观察,同时还可以得到胚胎形态发生改变的时间资料,并保证观察过程中胚胎发育环境的稳定,可以为0PN胚胎的来源提供线索。目前我中心也拥有这项技术。
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